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延边大学成功克隆我国首例红色荧光转基因五指山小型克隆猪

2012年07月10日

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6月25日,我校尹熙俊教授课题组成功克隆出国内首例单体红色荧光蛋白转基因五指山小型猪,代孕母猪顺利产下4头小猪,紫外灯照射下全部具有红色荧光特征,在可见光下肉眼也清晰可辨。

本项研究受吉林省留学回国人员科技创新创业优秀类、吉林省重点实验室建设项目资助。项目负责人为我校“吉林省转基因动物与胚胎工程重点实验室”主任、博士生导师尹熙俊教授,此次成功克隆的红色荧光转基因五指山小型猪为国内首例。此项研究达到了国际同类先进水平,研究所建立的转基因克隆技术平台,为进一步开展异体器官移植及治疗性克隆的研究奠定了基础。此前,日本明治大学于2008年克隆了带有红色荧光蛋白的橙红色(Kusbira-Orange)大白猪,中国科学院广州生物医药与健康研究所于2011年克隆了包括樱桃红(TdTomato)红色荧光蛋白等四色荧光长白猪,全身表达红色荧光蛋白的五指山小型猪未见报道。

红色荧光蛋白简称RFP,其基因所产生的蛋白质,在紫外波长范围的光线激发下,会发出现红色荧光。由于具有自发荧光等特征,在分子生物学和细胞生物学领域得到广泛应用。RFP作为为一种报告分子,在检测蛋白表达、蛋白和细胞荧光示踪、研究蛋白质之间相互作用和构象变化中,起到了重要作用。本项研究中采用的mRFP1是DsRed的一种单体变种,能够快速成熟,激发与发射波长长。克服了DsRed成熟缓慢,在体内形成四聚体,组织分布不均等问题。本研究中所采用的单体红色荧光蛋白PCX- mRFP1表达载体是上海复旦大学吴晓辉教授,于2011年6月赠送给我校转基因动物与胚胎工程省重点实验室的,尹熙俊教授及其科研团队经过大量复杂的实验,将其结构重新构建为PCR-mRFP1-neoR,从而增强了其对新霉素(neomycin)的抗药基因,并应用于体细胞核移植生产红色荧光转基因五指山小型猪的研究。

五指山小型猪是我国特有的、具有自主知识产权的高度近交小型猪,具有体型小、性成熟早、遗传稳定、适应性强等诸多特性,基因序列与人类相近在90%以上,其血型类似人类O型血,血液生理生化指标、各组织脏器对药物的代谢与人类相似。目前,五指山小猪已应用于药学、畜牧、兽医学,尤其用于人类比较医学诸多试验。

红色荧光转基因五指山小型猪的克隆成功为追踪猪组织、细胞和器官在受者体内存活和机能状况提供了重要标识,这种克隆猪将成为异种移植研发的理想动物模型,并将为人类器官移植的研究及各类动物模型培育、人源化猪器官移植开发应用研究提供科学依据。

新闻链接:1998年-2008年期间,尹熙俊先后在韩国国立庆尚大学校兽医科大学攻读博士学位、日本近畿大学动物发生学研究所从事博士后研究,主要研究方向是动物体细胞克隆技术。2003年,他在韩国首次成功研发体细胞克隆猪;2007年,成功克隆出世界首例转基因红色荧光猫。同年,尹熙俊回国,担任延边大学动物遗传育种与繁殖学科主任、动物胚胎工程研究所所长,作为项目负责人,他先后承担国家农业部转基因新品种培育重大专项项目抗口蹄疫转基因猪新品种培育、延边大学“211工程”三期重点学科建设项目“动物胚胎工程技术研究与产业化”、延边州科技发展计划项目,肉牛品种“延黄牛”体细胞克隆技术研究等重点攻关项目。尹熙俊带头建立的“延边大学一万级洁净实验室”,于2010年被批准为“吉林省转基因动物与胚胎工程重点实验室”,该实验室于2011年10月成功克隆了“五指山小型猪”。

可见光下的小猪

紫外灯照射下的小猪

紫外灯照射下的小猪

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